%0 Journal Article
%A 李冬梅
%A 彭少麟*
%T 薇甘菊乙醇酸氧化酶基因的克隆、序列分析和原核表达
%D 2010
%R 10.7525/j.issn.1673-5102.2010.04.010
%J 植物研究
%P 434-440
%V 30
%N 4
%X 利用SSH和RACE相结合的方法获得了薇甘菊乙醇酸氧化酶基因cDNA全长，并对该序列进行了生物信息学分析。随后将该基因的cDNA编码区克隆到原核表达载体pET-32a(+)中，构建重组表达质粒，转化到大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中进行表达。序列分析表明，薇甘菊乙醇酸氧化酶基因cDNA全长1 363 bp，编码369个氨基酸，命名为<em>MmGO</em>（GenBank登录号EU716626），推测的MmGO分子量为40.32 kDa，等电点为8.99。系统进化分析表明，MmGO与芸苔的GO序列亲缘关系比较近。将该基因重组到pET-32a(+)中进行原核表达，经0.1 mmol&middot;L<sup>-1</sup> IPTG，25℃诱导4 h，获得了具有较高表达水平的融合蛋白6&times;HisMmGO，Western-blot证实表达的6&times;His-MmGO能与抗6&times;His的单抗发生特异性反应，分子量约为60 kDa，与预测的融合蛋白6&times;His-MmGO分子量相符。为进一步研究融合蛋白6&times;His-MmGO的活性和功能奠定了基础。
%U https://bbr.nefu.edu.cn/CN/10.7525/j.issn.1673-5102.2010.04.010