%0 Journal Article
%A 陈敏敏
%A 韩炘
%A 李心
%A 吴若楠
%A 杨柳燕
%A 杨云尧
%A 张永春
%T 兰州百合原生质体的分离纯化和应用
%D 2024
%R 10.7525/j.issn.1673-5102.2024.06.014
%J 植物研究
%P 936-944
%V 44
%N 6
%X <p>该研究旨在建立兰州百合（<i>Lilium davidii</i> var. <i>unicolor</i>）原生质体分离纯化体系，以促进其基因功能研究和体细胞杂交育种。通过研究材料选择、渗透压调节剂浓度、酶添加量、酶解时间和纯化条件等关键因素，确定了酶解法提取兰州百合原生质体的最优参数。结果表明：继代30 d左右的兰州百合无菌苗叶片，在0.4 mol?L<sup>-1</sup>的甘露醇环境下，使用含15 g?L<sup>-1</sup>的纤维素酶和5 g?L<sup>-1</sup>的离析酶的酶解液酶解3 h，即能分离完整均一的兰州 百合叶肉原生质体，平均产量超过4×10<sup>6</sup>个?g<sup>-1</sup>，且细胞活力超过90%。在0.4 g?mL<sup>-1</sup> PEG-4000介导下转染 <i>35S：：GFP</i>质粒15 min，成功获得阳性转化子。同时，在0.5 g?mL<sup>-1</sup> PEG-4000与5 mmol?L<sup>-1</sup> CaCl<sub>2</sub>（pH=10）作用下，原生质体发生融合，形成双核细胞。该体系的建立为兰州百合体细胞杂交育种提供了高质量的细胞材料，也为其基因功能研究搭建了平台。</p>
%U https://bbr.nefu.edu.cn/CN/10.7525/j.issn.1673-5102.2024.06.014