%0 Journal Article
%A 常攀鹏
%A 李祥欣
%A 刘孟卓
%A 孟令桐
%A 苏丽伟
%A 熊天圣
%A 周晨光
%T 基于CRISPR-dCas9转录激活系统的毛果杨ANT转录因子功能分析
%D 2024
%R 10.7525/j.issn.1673-5102.2024.03.012
%J 植物研究
%P 431-440
%V 44
%N 3
%X <p>基于CRISPR-dCas9的基因转录激活表达能够避免基因异位表达带来的表型干扰，同时使基因有效地特异性表达。该研究利用新型CRISPR-Act3.0表达系统，在毛果杨（<i>Populus trichocarpa</i>）中对维管形成层特异表达转录因子ANT（AINTEGUMENTA）进行基因转录激活，创制遗传材料，并对基因的功能进行分析。首先对毛果杨PtrANTs转录因子进行同源分析，选取其中的PtrANT-4进行后续研究，对该基因进行克隆并利用荧光定量PCR分析其在各组织中的表达情况；其次在<i>PtrANT</i>-<i>4</i>启动子上设计3条gRNAs，构建CRISPR-dCas9转录激活表达载体，利用原生质体瞬时转化法检测该载体的表达；最后将该表达载体利用农杆菌介导法转化毛果杨，获得<i>PtrANT</i>-<i>4</i>转录激活遗传材料。结果表明：毛果杨中有4个PtrANTs转录因子，选取的<i>PtrANT</i>-<i>4</i>基因CDS序列全长为2 058 bp，编码685个氨基酸，在毛果杨侧生分生组织维管形成层特异表达。基于CRISPR-Act3.0表达系统成功构建的转录激活载体，在毛果杨木质部原生质体中转化后具有激活<i>PtrANT</i>-<i>4</i>表达的作用。获得的遗传转化植株中<i>PtrANT</i>-<i>4</i>基因仅在茎维管形成层中的表达量显著提高，说明<i>PtrANT</i>-<i>4</i>在茎维管形成层发育过程中可能起重要作用。该研究为PtrANT的功能研究奠定了一定研究基础，同时为维管形成层干细胞发育的机制研究提供了重要的遗传材料。</p>
%U https://bbr.nefu.edu.cn/CN/10.7525/j.issn.1673-5102.2024.03.012