%0 Journal Article
%A 班硕
%A 黎瑜
%A 吴春太
%A 曾日中
%T 橡胶树MSAP反应体系优化及其不同开割高度单株DNA甲基化分析
%D 2016
%R 10.7525/j.issn.1673-5102.2016.06.009
%J 植物研究
%P 860-869
%V 36
%N 6
%X 以‘热研7-33-97’橡胶树无性系幼嫩叶片为材料，通过利用单因素和正交试验相结合的方法，对酶切、预扩增和选择性扩增3个影响甲基化敏感扩增多态性（MSAP）分析的关键步骤的反应体系中关键影响因素进行了优化，建立橡胶树MSAP反应最佳体系，并用于高低割线橡胶树基因组DNA甲基化差异分析。结果表明：在50 μL反应体系中，750 ng基因组DNA用EcoRⅠ 20 U，HpaⅡ 20 U或MspⅠ 10 U于37℃恒温同步酶切10 h，酶切完全。最佳预扩增体系（20 μL）为：连接产物4 μL，MgCl2（25 mmol·L-1）0.15 μL，dNTPs（2.5 mmol·L-1）0.1 μL，上下游引物E-00/HM-00（10 μmol·L-1）各0.3 μL，Taq酶（5 U·μL-1）0.1 μL，10×PCR Buffer 2 μL。最佳选择性扩增反应体系（20 μL）为：稀释20倍的预扩增产物2 μL，MgCl2（25 mmol·L-1）0.1 μL，dNTPs（2.5 mmol·L-1）0.125 μL，上下游引物E+3/HM+3（10 μmol·L-1）各0.4 μL，Taq酶（5 U·μL-1）0.1 μL，10×PCR Buffer 2 μL。高低割线树DNA的甲基化比例分别为37.22%和36.43%，2种开割胶树基因组CCGG位点胞嘧啶全甲基化率明显高于半甲基化率，推测橡胶树基因组甲基化主要模式可能是CpG型。综上表明，建立的MSAP反应体系稳定可靠且重复性好，为后续橡胶树不同胁迫（割胶）程度DNA甲基化的研究奠定了基础。
%U https://bbr.nefu.edu.cn/CN/10.7525/j.issn.1673-5102.2016.06.009