%0 Journal Article
%A 邓威威
%A 金阳
%A 李旻
%A 马林龙
%A 张正竹
%T 茶树咖啡碱合成酶基因原核表达、及其抗体制备与鉴定
%D 2015
%R 10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.003
%J 植物研究
%P 333-339
%V 35
%N 3
%X 克隆出茶树咖啡碱合成酶基因，对其进行原核表达，并制备TCS1抗体，旨在从蛋白水平研究茶树体内TCS1的表达情况。根据GenBank登陆的TCS1基因的全长cDNA序列，找出其完整的ORF（开放阅读框），从茶树叶片cDNA中克隆了TCS1基因的开放阅读框，连接到pGEX-4T-2表达载体，经IPTG诱导表达重组蛋白pGEX-4T-2-TCS1。进行体外酶活检测后，亲和层析纯化重组蛋白，作为抗原免疫家兔，制备TCS1多克隆抗体。用ELISA方法检测抗体效价，Western blot检测抗体的特异性。通过优化诱导条件，得出重组蛋白的最佳表达条件为:30℃、4 h。诱导后的总蛋白、可溶性蛋白与包涵体蛋白均出现一条明显的外源蛋白条带。抗体经ELISA检测，效价为1∶2 000，Western blot检测表明抗体具有相对较好的特异性。构建了TCS1原核表达质粒，同时成功制备了抗TCS1的多克隆抗体。
%U https://bbr.nefu.edu.cn/CN/10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.003